紫苞舌蘭花粉基因轉殖系統之建立

in Domestic Conference (Abstract oral presentation), 國內研討會(摘要口頭發表)
標題紫苞舌蘭花粉基因轉殖系統之建立
出版類型國內研討會(摘要口頭發表)
出版年度2007
AuthorsYu-Chung Chiang, 江友中
會議名稱台灣園藝學會96年年會暨會員大會
出版日期Dec 21 2007 12:0
會議地點Taichung
其他編號0000
中文摘要

利用癒合組織(callus)進行基因轉殖必須先建立其組織培養再生系統,但此方法容易遭遇組織培養的品種特異性問題,因此會增加基因轉殖的困難。本研究目的在建立一個簡單、有效率的紫苞舌蘭(Spathoglottis plicata Blume)基因轉殖的方法。而此實驗是以花粉為媒介,將基因導入花粉中,進行授粉已獲取轉殖植株。利用農桿菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105 把帶有由CaMV 35S 啟動子所驅動的GFP(green fluorescent protein)報導基因和抗生素hygromycin的質體pCAMBIA 1304轉進植株中以建立轉殖技術。先採集花粉塊,使用花粉萌芽液態培養基 (pollen germination medium --PGM)16 小時使之萌芽。再將萌芽的花粉和農桿菌共培養,之後以人工受粉使其開始發育成果筴。使用螢光顯微鏡觀察發育兩星期後的果莢切片,可發現GFP 螢光反應以及在聚合?連鎖反應(polymerase chain reaction) 的電泳圖中發現我們轉殖進入的目標基因。當果筴成熟後,將種子無菌播種。發芽後使用含有抗生素hygromycin 的培養基進行篩選,篩選出擬轉殖殖株後,使用PCR 做初步的檢測,而後使用南方點墨法(southern blot)以進一步確認。

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